Dan Aykroyd débute sa carrière de comédien au théâtre et dans les night clubs. Manager du club Le 505 de Toronto, il fait la rencontre de John Belushi alors à la recherche de nouveaux talents pour l'émission National lampoon radio hour. En 1975, tous deux sont choisis pour le tout nouveau projet télévisuel de Lorne Michael : Saturday night live. Le succès est au rendez-vous. Après ses apparitions dans la comédie canadienne Love at first sight (1977) et le parodique 1941 (1979) de Steven Spielberg, il partage aux côtés de son fidèle ami Belushi, afflublé comme lui d'un costard noir, d'un chapeau noir et de lunettes noires, l'affiche du musical Blues brothers (1980). Le film est une telle réussite qu'une suite (Blues brothers 2000) est prévue en 1997, malheureusement sans James Belushi, décédé en 1982.Seul, Dan Aykroyd se trouve de nouveaux partenaires de jeu comiques, issus comme lui de Saturday night live, parmi lesquels Eddie Murphy (Un fauteuil pour deux, 1982), Bill Murray (S.O.S. fantômes, 1984 ; S.O.S fantômes II, 1989) et Chevy Chase (Drôles d'espions, 1985). Tout en restant dans le registre de la comédie, il mène l'enquête aux côtés de Tom Hanks dans Dragnet (1987) et épouse une extra-terrestre en la personne de Kim Basinger en 1988. Il tente ensuite une incursion dans le drame avec Miss Daisy et son chauffeur (1989), film dans lequel il campe le fils de Jessica Tandy. Cette prestation se voit saluer par une nomination pour le meilleur second rôle masculin aux Oscars. Malgré cette distinction et l'envie d'élargir son répertoire, cette "bonne bouille" du cinéma américain doit souvent se contenter, dans les années 90, de simples rôles secondaires comme dans la comédie dramatique My girl (1991), le thriller Les Experts (1992), la biographie Chaplin (1992), la romance Feeling Minnesota (1996) ou le drame d'époque Chez les heureux du monde (2000).Finalement, dans les années 2000, Dan Aykroyd retourne à ses premières amours, la comédie, non savoir caressé le rêve de prendre sa retraite. Gouverneur dans Evolution (2001) d'Ivan Reitman, il tourne Le Sortilège du scorpion de Jade (id.) sous la direction de Woody Allen, incarne le père de Britney Spears dans Crossroads (2002), le mari de Kathy Bates dans Amours suspectes (2003), le médecin d'Adam Sandler dans Amour et amnésie (2004) ainsi qu'un voisin bien envahissant dans Un Noël de folie ! (id.).
Après s'être illustré dans Quand Chuck rencontre Larry, Dan Aykroyd est à l'affiche en 2009 de la comédie War, Inc., aux côtés de John Cusack.
